豬Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說明書 本試劑盒僅供研究使用。 檢測范圍： 96T 1.6μg/L -65μg/L 使用目的： 本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)含量。 實驗原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中豬Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)水平。用純化的豬Ⅲ型 前膠原肽(PⅢNP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Ⅲ型前膠 原肽(PⅢNP)，再與 HRP 標(biāo)記的Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體 復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸 的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)呈正相關(guān)。用酶 標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中豬Ⅲ型前膠原肽 (PⅢNP)濃度。 標(biāo)本要求 1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能 馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 2.不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 操作步驟 1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行 稀釋。 60μg/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 30μg/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 15μg/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 7.5μg/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 3.75μg/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、 待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。 4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。 7. 溫育：操作同 3。 8. 洗滌：操作同 5。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15 分鐘. 10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終 止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 操作程序總結(jié)： 計算 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出 標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋 倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。注意事項 1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。 3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定， 計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。 5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6.底物請避光保存。 7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 9.本試劑不同批號組分不得混用。 10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。 保存條件及有效期 1.試劑盒保存：;2-8℃。 2.有效期：6 個月 注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師。 天津本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。 | 
