elisa實驗:樣本采集和保存問題
一、不同類型樣本的采集要點
血清樣本?:靜脈采血后室溫靜置1小時,4℃下2500rpm離心10分鐘取上清,全程避免溶血,紅細胞釋放的過氧化物酶會造成非特異性顯色,干擾HRP標記的ELISA結果。
血漿樣本?:采血后30分鐘內冰上分離血漿,優先選用EDTA作為抗凝劑,避免肝素抗凝,抗凝不全會因纖維蛋白原干擾產生假陽性。
尿液/腦脊液等樣本?:用無菌容器收集,4℃下2500rpm離心10分鐘去除沉淀,樣本需避免經血、陰道分泌物污染。
細胞上清/組織樣本?:細胞上清直接收集后離心去除細胞碎片;組織樣本需液氮速凍,后續勻漿后離心取上清檢測。
二、樣本的規范保存條件
24-48小時內檢測:可置于2-8℃環境暫存,避免長時間放置導致蛋白聚合加深本底。
1周內檢測:分裝后凍存于-20℃,避免反復凍融,反復凍融會造成蛋白降解,細胞上清類樣本凍融1-2次后就可能無法用于檢測。
長期保存:分裝后置于-70℃環境,可穩定保存6個月以上,分裝時按單次檢測量分份,避免多次開蓋污染樣本。
三、關鍵注意事項
樣本采集后需盡快處理,避免細菌污染,菌體自帶的內源性HRP會引發假陽性結果。
冷凍樣本復溶后需輕柔混勻,若出現沉淀需再次離心澄清后再檢測,避免雜質干擾反應體系。
提前預估樣本用量,準備2-3倍于單次檢測的體積,預留重復樣的余量,避免樣本量不足導致實驗中斷。
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