Elisa試劑盒樣本檢測步驟

Elisa試劑盒樣本檢測步驟

ELISA試劑盒樣本檢測的核心步驟?包括加樣、溫育、洗滌、顯色和讀數，具體流程依據試劑盒類型（如雙抗體夾心法、競爭法等）略有差異，但基本遵循標準化操作。

標準操作流程

加樣?

將待測樣本（如血清、血漿）和標準品按說明書要求加入已包被抗體的微孔板中，每孔?100 μL?，注意更換槍頭避免交叉污染。

空白孔不加樣本，僅加稀釋液作為對照。

溫育?

用封板膜封閉反應孔，置于?37℃恒溫培養箱?中孵育?60–90分鐘?，使抗原與固相抗體充分結合。

溫育期間避免震動，確保反應環境穩定。

洗滌?

孵育結束后，甩盡孔內液體，使用洗滌液（如PBS緩沖液）?清洗3–5次?，每次浸泡30秒，去除未結合物質。

洗滌不充分會導致背景值升高，影響結果準確性。

加酶標試劑?

每孔加入?100 μL酶標二抗?（如HRP標記的檢測抗體），覆蓋后再次于37℃孵育?30–60分鐘?。

酶標試劑需現配現用，避免活性下降。

再次洗滌?

重復上述洗滌步驟，清除未結合的酶標抗體，減少非特異性信號。

加底物顯色?

加入?TMB等顯色底物溶液?（約100 μL/孔），避光孵育?15–20分鐘?，觀察顏色變化。

顯色時間需嚴格控制，防止過度反應。

終止反應?

加入?50 μL終止液?（如硫酸溶液），使反應終止，溶液由藍色變為黃色。

加終止液后應在?5分鐘內?完成讀數，避免光密度值漂移。

讀數與分析?

使用酶標儀在?450 nm波長?下測定各孔吸光度（OD值），必要時以630 nm或570 nm進行校正。

根據標準曲線計算樣本中目標抗原或抗體的濃度。

注：本公司產品供科研實驗，以上供參考！

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