小鼠肌糖原(MG)ELISA試劑盒科研說明書
小鼠肌糖原(MG)ELISA試劑盒?是一種用于體外定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中肌糖原含量的科研工具,采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)原理。
實驗原理
試劑盒通過預先包被的小鼠肌糖原(MG)捕獲抗體,依次加入標本、標準品和HRP標記的檢測抗體,經溫育后洗滌,使用TMB底物顯色。顏色深淺與樣品中肌糖原含量呈正相關,最終在450nm波長下測定吸光度(OD值)并計算濃度。
樣本處理及要求
血清?:全血標本室溫放置2小時或4℃過夜,1000×g離心20分鐘,取上清檢測或-20℃/-80℃保存(避免反復凍融)。
血漿?:使用EDTA或肝素抗凝,采集后30分鐘內2-8℃、1000×g離心15分鐘,取上清。
組織勻漿?:用預冷PBS沖洗組織,稱重后按1:9比例加入PBS(推薦含蛋白酶抑制劑),冰上研磨,可進行超聲破碎或反復凍融,5000×g離心5~10分鐘取上清。
細胞培養上清?:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測。
試劑盒組成(96孔配置)
名稱 配置
微孔酶標板 8孔×12條
標準品 0.3 mL × 6管(濃度:480、240、120、60、30、15 ng/mL)
樣本稀釋液 6 mL
檢測抗體-HRP 10 mL
20×洗滌緩沖液 25 mL
底物A 6 mL
底物B 6 mL
終止液 6 mL
封板膜 2張
說明書 1份
自封袋 1個
操作步驟簡要
試劑與樣本平衡至室溫(20–25℃)。
設置標準品孔和樣本孔,加入50μL標準品或待測樣本。
每孔加入HRP標記檢測抗體100μL,封板后37℃溫育60分鐘。
洗板5次,拍干。
每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15分鐘。
加入終止液50μL終止反應。
15分鐘內于450nm測定OD值,根據標準曲線計算濃度。
注意事項
所有試劑使用前需平衡至室溫。
洗滌需凈,防止交叉污染。
底物避光保存,變藍則不可使用。
避免標本溶血,以免影響結果。
不同批號試劑勿混用。
注:本公司產品供科研實驗,以上供參考!
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